Frazione microsomiale S9 di fegato di ratto indotta da PB/naftoflavone per test di Ames, MNvit, test di aberrazione cromosomica
Poiché i batteri non sono in grado di metabolizzare le molecole, i test di mutagenicità come il test di Ames (OECD 471), il test del micronucleo in vitro (MNvit, OECD 487) e il test di aberrazione cromosomica (OECD 473) vengono eseguiti sia in assenza che in presenza di questa frazione microsomiale.
La S9, derivata dal fegato di ratto indotto con fenobarbital e β-naftoflavone, permette di simulare il metabolismo epatico e di identificare potenziali mutageni che potrebbero essere attivi solo dopo il metabolismo. Questi test vengono utilizzati per valutare la genotossicità di varie sostanze chimiche, tra cui xenobiotici, erbicidi, pesticidi, biocidi, cosmetici, preparati farmaceutici e contaminanti ambientali presenti in suolo e acque reflue.
La frazione S9 indotta da fenobarbitale/ß-naftoflavone dopo la ricostituzione è una soluzione tamponata contenente la frazione S9 post-mitocondriale di un pool di fegati di ratti maschi Sprague-Dawley.
Benefici del Fegato di Ratto S9 della Xenometrix
• Elevate attività CYP nel fegato di ratto S9 della Xenometrix rispetto al fegato di ratto S9 indotto da PB/NF di altri competitori.
• Durata di conservazione di 36 mesi (non 24 mesi)
• Bassa variabilità da lotto a lotto.
• Preparazione liofilizzata, insensibile alle variazioni di temperatura durante la spedizione.
• Consegnabile entro 1-2 giorni dal magazzino Xenometrix
• Può essere sottoposto a 1 ciclo di congelamento/scongelamento dopo la ricostituzione senza una significativa perdita di attività.
• Il controllo di qualità viene eseguito con 3 diversi test di Ames: test di Ames in piastra di Petri (OECD TG471), test di Ames in piastre di agar a 6 pozzetti, test di Ames in test di fluttuazione in micropiastra liquida
Composizione della frazione S9 liofilizzata cod. PRS-PB0X (da 1 ml o da 2 ml) .
La S9 è una preparazione complessa che include sia componenti microsomiali che citosolici, ed è comunemente utilizzata negli studi di metabolismo in vitro per valutare l’attività di biotrasformazione di composti chimici, come il fenobarbitale e il β-naftoflavone.
- Include sia le frazioni microsomiali (ricche di enzimi di Fase I come i citocromi P450) che quelle citosoliche (contengono enzimi di Fase II come le transferasi).
- Contiene anche enzimi come N-acetiltransferasi, metiltransferasi, solfotransferasi, glutatione transferasi, aldeide ossidasi e xantina ossidasi, che sono coinvolti nei processi di metabolismo secondario e di detossificazione.
- Attività enzimatica:
- La biotrasformazione dei composti avviene simultaneamente attraverso le vie di Fase I (ossidazione, riduzione, idrolisi) e Fase II (conjugazione).
- La presenza di enzimi citosolici e microsomiali permette di simulare in vitro le reazioni di metabolismo epatico.
- Necessità di cofattori:
- Gli enzimi di Fase I, come i citocromi P450, richiedono NADPH come cofattore per l’attività di ossidazione.
- Poiché gli enzimi nelle frazioni S9 sono diluiti, è essenziale aggiungere un sistema di rigenerazione del NADPH (come previsto dal kit S9 Cofactor Kit, art. n. PCO-0800) per mantenere la reattività enzimatica durante l’esperimento.
- Preparazione e utilizzo:
- Prima dell’incubazione, vengono aggiunti i cofattori necessari (ad esempio NADPH) alla soluzione S9.
- La soluzione tamponata contenente la frazione S9 post-mitocondriale viene ricostituita con questi cofattori per mantenere l’attività enzimatica durante il test di metabolismo.
In sintesi, la preparazione S9 viene arricchita con cofattori come NADPH per supportare le reazioni di Fase I, consentendo così di studiare in vitro i metaboliti di composti come fenobarbitale e β-naftoflavone, e valutare il loro metabolismo epatico in modo più accurato.
Caratteristiche
- Attività: Paragonabile a quella del fegato di ratto congelato (vedere allegato)
- Concentrazione proteica: 25-35 mg/ml
- Conservazione: a -20°C o -80°C
- Spedizione: con blocchi refrigerati da stoccaggio esterno in Germania o Svizzera
- Durata di conservazione: da 12 a 36 mesi
- Controllo qualità: sottoposto a controlli su tutti i ceppi disponibili presso Xenometrix, tra cui TA98, TA100, TA1535, TA1537, E. coli uvrA (pKM101), E. coli Combo (E. coli uvrA + pKM101). In allegato.
- Conformità: alle linee guida OECD 471, ICH M7, OECD 487, OECD 473, ISO 13449.
- Volumi richiesti per test di Ames:
- MicroAmes24: 0,44 mL/ceppo/composto
- Ames MPF: 0,35 mL/ceppo/composto
- Piastra di agar Ames: 1,4 mL/ceppo/composto
- Applicazioni aggiuntive: utilizzabile anche per il test del micronucleo (MNvit) e il test delle aberrazioni cromosomiche.
- Incluso: anche nei kit Ames MPF completi